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發(fā)布時間:2012-12-03
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(1)柱色譜(column chromatography) 固定相裝在色譜柱內(nèi)稱為柱色譜。根據(jù)色譜柱的尺寸、結構和制備方法不同,又分為填充柱(packed column)色譜和毛細管柱(capillary column)或開管柱(open column)色譜。GC、HPLC均為柱色譜。
(2)平板色譜(planar chromatography) 固定相呈平板狀,當流動相流過時,樣品組分在平板上展開,進行分離。平板色譜包括薄層色譜(thin layer chromatography)和紙色譜。當固定相以均勻薄層涂敷在玻璃板或塑料板上,或?qū)⒐潭ㄏ嘀苯又瞥杀“鍫?,稱為薄層色譜(TLC)。用濾紙做固定相或固定相載體的色譜,則稱為紙色譜(PC)。
(3)紙色譜(又稱紙上層析)是以紙為載體的液相色譜法,屬于分配色譜的一種。它是借助濾紙作為支持物,用水飽和后構成固定相。當與固定相不相混溶的有機溶劑流動相通過固定相時,使被分離的各個組分連續(xù)地在兩相之間動態(tài)分配,從而達到分離的一種操作。濾紙本身是惰性的,不參與分離組分的過程,只起負載水分的作用,分離由組分在流動相和紙上水分之間的分配不同所引起。因此在紙色譜中,組分在兩相中的分配系數(shù)起主要作用?;衔镌诩埳V上的位置用比移值Rf表示。
Rf=化合物移動距離/展開劑移動距離
Rf值隨被分離化合物的結構、固定相與流動相的性質(zhì)、溫度以及紙的質(zhì)量等因素而變化。當溫度、濾紙等實驗條件固定時,比移值Rf就是一個特有的常數(shù),因而可作定性分析的依據(jù)。由于影響Rf值的因素很多,實驗數(shù)據(jù)往往與文獻記載不完全相同,因此在鑒定時常常采用標準樣品作對照。此法一般用于多功能團或高極性化合物如糖、氨基酸等有機物質(zhì)的微量(5~500mg)定性分析。
1.2.4 不同色譜方法的比較
紙色譜、薄層色譜、高效液相色譜以及氣相色譜是四類廣泛應用的色譜技術,它們各有優(yōu)缺點及適用范圍。紙色譜是幾種色譜中最廉價的一種,但展開時間長,用來分離水溶性物質(zhì)比較方便。薄層色譜的優(yōu)點是設備和操作比較簡單,展開時間快,應用范圍及分析對象很廣。無論是無機、有機、生化、藥物等都可應用薄層色譜;從化合物的性質(zhì)來看,小分子或大分子化合物,水溶性或非水溶性物質(zhì)等各種類型物質(zhì)的分離、精制、鑒定和定量都可用薄層色譜。
高效液相色譜在定量的精確性和穩(wěn)定性等方面比薄層色譜更好,但設備和實驗費用較高。氣相色譜定量準確性高,但只適用于在設備柱溫條件下(一般為200~300℃)能汽化的化合物,因此限制了它的應用范圍。在有機化合物中大約只有20%~30%的產(chǎn)品適用,在實際應用中所占比例偏少,但仍具有液相色譜不可取代的優(yōu)勢。表1-2就不同色譜在設備、適用對象等方面的差異進行了比較。
表1-2 幾種色譜方法的比較
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項目 |
紙色譜 |
薄層色譜 |
高效液相色譜 |
氣相色譜 |
|
設備 |
簡單 |
較簡單 |
復雜 |
復雜 |
|
分析對象 |
水溶性物質(zhì) |
較廣 |
較廣 |
能汽化的高溫穩(wěn)定物質(zhì) |
|
樣品用量 |
nμg |
nμg |
0.01~1μg |
0.01~1μg |
|
檢測靈敏度/g |
10-5 |
10-7 |
10-8~10-12 |
10-10 |
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檢測方法 |
以物質(zhì)的化學特性或物理特性為基礎的顯色劑、掃描法 |
以物質(zhì)的化學特性或物理特性為基礎的顯色劑、掃描法 |
紫外、可見熒光光譜、示差折光、電化學 |
熱導池、氫火焰 |
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定量準確度 |
|
+ |
++ |
++ |
|
定量重現(xiàn)性/%(體積分數(shù)) |
|
2~5 |
1 |
1 |
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展開及洗脫時間/min |
160~480 |
20~100 |
5~60 |
5~60 |