大多數(shù)分離工作是在室溫下進(jìn)行的，如果實(shí)驗(yàn)室的溫度保持不變的話沒什么問題，但大多數(shù)工作環(huán)境的溫度會(huì)有波動(dòng)，這對(duì)方法的實(shí)驗(yàn)室間重現(xiàn)性非常不利。溫度對(duì)等度分離的保留時(shí)間有影響，一般來說，每增加1℃，保留時(shí)間就減少1－3％。即使在溫度控制、日夜恒溫的環(huán)境下，由于晝夜溫差的影響，室溫也會(huì)發(fā)生較大的變化，特別是在進(jìn)行大批量的樣品分析時(shí)（如人體藥代或生物等效性試驗(yàn)），能使保留時(shí)間發(fā)生較大的變異。與等度洗脫相比，梯度洗脫的保留時(shí)間對(duì)溫度的變化較不敏感。 溫度的變化會(huì)引起色譜柱對(duì)所要分離物質(zhì)選擇性的變化，這種變化取決于化合物的性質(zhì)，所以可通過控制溫度來實(shí)現(xiàn)化合物的分離。色譜柱溫度平衡得不好，會(huì)使得峰展寬。柱溫變化，保留時(shí)間和柱選擇性發(fā)生變化，峰寬隨之變化，柱溫升高使得理論塔板數(shù)增大，峰變窄，靈敏度增高。如果色譜柱、溶劑瓶、泵和自動(dòng)進(jìn)樣器都在室溫下工作，則整個(gè)系統(tǒng)的溫度是一致的。如果對(duì)色譜柱進(jìn)行加熱，而溶劑和系統(tǒng)的其它部分在室溫下工作，會(huì)使得色譜柱入口的溫度低于出口的溫度，這種溫度梯度對(duì)峰形不利。解決的辦法可以在自動(dòng)進(jìn)樣器與柱子之間加一個(gè)預(yù)熱器（preheater），如有些商品化的柱溫箱已經(jīng)帶預(yù)熱器了。如此一來，有些峰展寬和峰拖尾的原因就比較好解釋了，色譜帶的前緣溫度高于后緣，所以移動(dòng)的速度也就較快，因而產(chǎn)生峰展寬和峰拖尾?，F(xiàn)在使用預(yù)熱器來改善峰形是較普遍的方法。 

1、色譜柱的貯存： 

a、柱的貯存條件影響柱壽命，貯存液中至少應(yīng)含有20％有機(jī)溶劑，以防止微生物的滋生； 

b、絕對(duì)不能用緩沖液貯存色譜柱； 

c、用5倍柱體積的不含緩沖液的流動(dòng)相沖洗色譜柱以去除緩沖液和鹽。