1、高效液相色譜是如何實現(xiàn)高效、快速、靈敏的?

解：氣相色譜理論和技術(shù)上的成就為液相色譜的發(fā)展創(chuàng)造條件，從它的高效、高速和高靈敏渡得到啟發(fā)，采用5一10四微粒出定相以提高柱效，采用高壓泵加快液體流動相的流速;設計高靈敏度、死體積小的紫外、熒光等檢測器，提高檢測靈敏度，克服經(jīng)典液相色譜曲缺點，從而達到高效、快速、靈敏。

2、與氣相色譜法相比高效液相色譜有哪些優(yōu)點和不足?

解：氣相色譜的分析對象是在校溫下具有一定的揮發(fā)性、對熱穩(wěn)定購物質(zhì)。因此它只限于分析氣體和沸點低的化合物或揮發(fā)性的衍生物。而高效液相色譜由于以液體作為流動相，只要被分析的物質(zhì)在選用的流動相中有一定的按解度，便可以分析，所以適用性廣，不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，特別適合于那些沸點高、極性強、熱穩(wěn)定性差的化合物，例如，生化物質(zhì)和藥物、離子型化合物、熱穩(wěn)定性差的天然產(chǎn)物等。在目前已知的有機化臺物中，

只有20%樣品可不經(jīng)化學處理而能滿意地用氣相色譜分離，80%的有機化合物要用高效液相色譜分析。

氣相色譜中流動相是惰性的，它對組分沒有作用力，僅起運載作用、而高效液相色譜的流動相不僅起運載作用，而且流動相對組分有一定親合力，可以通過改變流動相種類和組成提高分離的選擇性，另外可作流動相的化合物多，選擇余地廣。

與氣相色譜相比，高效液相色譜的另一個優(yōu)點是樣品的回收比較容易，只要開口容器放在柱子末端，就可以很容易地將所分離的各組分收集?；厥帐嵌康模梢杂脕硖峒兒椭苽渚哂凶銐蚣兌鹊膯我晃镔|(zhì)。

高效液相色譜不足的是，日前檢測器的靈敏度不及氣相色譜。必須特別注意“柱外效應”對柱效率及色譜分離的影響。

3、試比較氣相色譜與液相色譜的H-u曲線，分析產(chǎn)生不同的原因。

解：從圖可看出，氣相色譜和液相色譜得到的H-u曲線，形狀迥然不同，流動相的流速對柱效的影響也不一樣，在氣相色譜的H-u曲線上，塔板高度H隨u變化呈雙曲線.曲線有一最低點，這時柱效最高，板高最小，流速最佳。而液相色譜H-u曲線，未出現(xiàn)流速降低板高增加的現(xiàn)象，由于最佳流速趨近于零，一般觀察不到最低板高相對應的最佳流速。在正常的情況下，流速降低，板高H總是降低的，這與氣相色譜明顯不同。在氣相色譜中流動相流速增大，柱效呈直線降低，而在液相色譜中，流動相流速增大，柱效平緩降低。其主要原因是液相色譜的流動相為液體，液相的擴散系數(shù)Dm很小，通常僅為氣相擴散系數(shù)的104~105分之一，所以分子擴散項在低u時也不起多大作用、因此液相色譜H-u曲線未能出現(xiàn)流速降低，板高增加現(xiàn)象。到高速時，雖然柱內(nèi)線速提高，但固定相和流動相的傳質(zhì)都能很快進行，故H-u曲線上升緩慢。

4、簡述液相色譜中引起色譜峰擴展的主要因素，如何減少諳帶擴張、提高柱效?

解：液相色譜中引起色諾峰擴展的主要因素為渦流擴散、流動相傳質(zhì)、停留流動相傳質(zhì)及柱外效應。

在液相色譜中要減小譜帶擴張，提高柱效，要減少續(xù)料顆粒直徑，減小境料孔穴深度，提高裝填的均勻性，采用低粘度溶劑作流動相，流速盡可能低，同時要盡可能采用死體積較小的進樣器、檢測器、接頭和傳輸管線等。

5、為什么要提出折合參數(shù)?有何特點?

解：我們知道色譜操作條件對板高是有影響的.Giddings發(fā)現(xiàn)，固定相相同，填充良好，共是粒度dp不同，因而H-u曲線不同，在液相色譜中，培板高度是粒度的函數(shù)，為了比較不向色譜條件下的板高H.提出折合參數(shù)，包括折合板高、折合流速、折合柱長。其特點是對于不同粒度的填料能得到相同的H—ur 曲線，因此可以在相同的條件下比較不同填料的柱效。

6、色譜柱A長度為15cm，載體粒度為5m.另一B柱長為30cm，載體粒度為10m，兩柱的柱效相等嗎?

解：A柱的折合柱長為30000，B柱的折合柱長也為30000，表明組分在兩根柱內(nèi)從柱人口到出口都經(jīng)過30000個載體顆粒.兩校的柱效相等。

7、何謂梯度淋洗，適用于哪些樣品的分析?與程序升溫有什么不同?

解：梯度淋洗就是在分離過程中.讓流動相的組成、極性、pH值等按‘定程序連續(xù)變化。使樣品中各組分能在最佳的k下出峰。使保留時間短、擁擠不堪、甚至重疊的組分，保留時間過長而峰形扁平的組分獲得很好的分離，特別適合樣品中組分的k值范圍很寬的復雜樣品的分析。梯度淋洗十分類似氣相色譜的程序升溫，兩者的目的相同。不同的是程序升溫是通過程序改變柱溫。而液相色譜是通過改變流動相組成、極性、pH值來達到改變k的目的。

8、流動相為什么要預先脫氣?常用的脫氣方法有哪幾種?

解：流動相中溶解氣體存在以下幾個方面的害處，氣泡進入檢測器，引起光吸收成電信號的變化，基線突然跳動，干擾檢測;溶解在溶劑中的氣體進入色譜柱時，可能與流動相或固定相發(fā)生化學反應;溶解氣體還會引起某些樣品的氧化降解.對分離和分析結(jié)果帶來誤差。因此，使用前必須進行脫氣處理。常用的脫氣法有以下幾種：(1)加熱脫氣法;(2)抽吸脫氣法;(3)吹氦脫氣法;(4)超聲波振蕩脫氣法。

9、按固定相孔徑大小分類，液相色譜固定相有哪幾類?各有什么特性及適用范圍?

解：從固定相的孔隙深度考慮，液相色譜固定相分為表面多孔型(薄殼型)和全多孔型(全孔型)兩類。

表面多孔型固定相多孔層厚度小.孔淺，相對死體積小，出峰迅速，柱效高，顆粒較大，滲透性好，由于孔淺，梯度淋洗時，當流動相成分改變后.孔內(nèi)外流動相成分能迅速達到平衡，機械強度高，裝柱容易，其不足的是由于多孔層厚度小，因而柱容量小，最大允許樣品量受到限制，適用于比較簡單的樣品分析及快速分析。

全多孔型固定相，由于顆粒很細，孔仍然很淺.傳質(zhì)速度較快，柱效高。梯度淋洗時孔內(nèi)外流動相成分的平衡速度仍然較快.其最大特點是柱容量大，最大允許樣品量是表面多孔型的5倍，但裝填的什于滲透性低，因而需要更高的操作壓力.制柱比表面多孔型的難。這種固定相特別有利于痕量組分及多組分復雜混合物的分離分析。

10、什么叫化學鍵合色譜? 與液—液色譜相比有何優(yōu)點?

解：通過化學反應，將固定液鍵合到載體表面，此種固定相稱為化學鍵合固定相;采用化學鍵合固定相的色譜法，稱為化學鍵合色譜。

與液—液分配色譜相比，鍵合色譜法的主要優(yōu)點：(1)化學鍵合固定相非常穩(wěn)定，在使用過程中不流失。(2)適宜用梯度淋洗。(3)適合于k范圍很寬的樣品。(4)由于鍵合到載體表面官能團，既可是非極性的，也可是極性的，因此應用面廣。